RPMI-1640培養(yǎng)基不僅是科研工作者手中的得力助手，更是推動生命科學(xué)研究不斷前進(jìn)的重要力量。在未來的日子里，隨著生命科學(xué)領(lǐng)域的不斷發(fā)展和創(chuàng)新，將繼續(xù)發(fā)揮其重要作用，為人類健康和科技進(jìn)步貢獻(xiàn)更多的力量。
 

　　RPMI-1640培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的使用：
 

　　1.細(xì)胞復(fù)蘇后的換液
 

　　-當(dāng)從凍存狀態(tài)復(fù)蘇細(xì)胞后，細(xì)胞接種到含有適量RPMI-1640培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。一般接種密度根據(jù)細(xì)胞種類和實驗?zāi)康挠兴煌?，例如對于貼壁細(xì)胞，每平方厘米可能需要接種數(shù)千個細(xì)胞。
 

　　-細(xì)胞接種后，將其放入37℃、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在細(xì)胞復(fù)蘇后的24小時內(nèi)，需要觀察細(xì)胞的貼壁情況和狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞貼壁后(一般貼壁細(xì)胞在接種后幾個小時內(nèi)開始貼壁)，可以更換新鮮的RPMI-1640培養(yǎng)基，以去除復(fù)蘇過程中可能產(chǎn)生的一些對細(xì)胞有害的物質(zhì)，如凍存保護(hù)劑二甲基亞砜(DMSO)。
 

　　2.常規(guī)換液
 

　　-根據(jù)細(xì)胞的生長速度和代謝情況確定換液頻率。一般來說，對于生長較快的細(xì)胞，可能需要每2-3天換液一次；對于生長較慢的細(xì)胞，可以每3-4天換液一次。
 

　　-換液時，小心地吸出舊的培養(yǎng)基，注意不要吸到細(xì)胞。然后加入適量的新鮮RPMI-1640培養(yǎng)基，一般以覆蓋細(xì)胞單層為宜。例如，對于一個T-25培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞，每次可以加入3-5ml的培養(yǎng)基。
 

　　3.傳代培養(yǎng)
 

　　-當(dāng)細(xì)胞生長達(dá)到一定的匯合度(例如，貼壁細(xì)胞匯合度達(dá)到80-90)時，需要進(jìn)行傳代。首先棄去舊的培養(yǎng)基，用適量的磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗細(xì)胞，以去除殘留的培養(yǎng)基和細(xì)胞代謝產(chǎn)物。
 

　　-加入適量的胰蛋白酶-EDTA消化液(一般根據(jù)培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的底面積加入適量，如T-25培養(yǎng)瓶可以加入0.5-1ml)，將細(xì)胞消化下來。消化時間根據(jù)細(xì)胞種類和胰蛋白酶的活性而定，一般在室溫下消化幾分鐘，直到細(xì)胞變圓、開始脫落。
 

　　-加入含血清(如胎牛血清，終濃度一般為10左右)的RPMI-1640培養(yǎng)基終止消化，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速(如1000rpm，離心5分鐘)離心收集細(xì)胞。
 

　　-棄去上清液，用適量的RPMI-1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，然后按照合適的比例(如1:2或1:3等)將細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)容器中，繼續(xù)培養(yǎng)。